Основы молекулярной и клеточной биологии (2024) Л9 ПЦР Ч3 Неспецифичные флуоресцентные красители

Официальный адрес канала: https://dzen.ru/id/677595ffa6e6be347fb3bc68 Хотя метод полуколичественной ПЦР уже позволял анализировать изменения в экспрессии генов, с появлением новых технологий появилась возможность выйти на качественно новый уровень. Для детекции ДНК стали применять неспецифичные флуорофоры типа Sybr green, которые связывали двуцепочечную ДНК, но слабо взаимодействовали с одноцепочечными нуклеиновыми кислотами. В свою очередь разработка цифровых видеокамер сделало возможным детектировать сигнал бесконтактно, не останавливая реакцию для отбора проб. В лаборатории по всему миру пришла количественная ПЦР или ПЦР в режиме реального времени. Несмотря на ограничения по специфичности, красители типа Sybr green имели уникальные свойства, несвойственные ДНК-овым зондам: с их помощью можно было оценить правильно ли подобраны праймеры и нет ли среди продуктов ПЦР посторонних продуктов амплификации.